Mostreig de nòduls limfàtics en canals de boví per al diagnòstic de tuberculosi
En el marc del programa d’erradicació de la tuberculosi bovina, el Ministeri d’Agricultura, Pesca i Alimentació obliga a la presa de mostres per al diagnòstic de tuberculosi en tots aquells animals que han donat positiu a les proves de pell (intradermotuberculinització) i que són sacrificats a l’escorxador. L’objectiu és poder confirmar la malaltia i aïllar el micobacteri per poder fer estudis d’epidemiologia molecular que ens ajudaran a entendre l’origen de cada brot: infecció residual, contacte amb reservoris domèstics o silvestres, etc. I així poder prendre les millors decisions necessàries en cada cas.
El control de la tuberculosi és molt complex i depèn de molts factors que el resultat del esforços del programa siguin exitosos. En aquesta entrada volem repassar, en el context de la inspecció veterinària de les canals, el mostreig dels teixits diana per tal d’assegurar que aquest resultarà en una màxima sensibilitat diagnòstica. En alguna ocasió detectem alguna incidència i comentarem les més comuns i la localització anatòmica de les diferents mostres.
El Ministeri va editar un manual de mostreig que podeu consultar aquí.
La mostra d’elecció per al diagnòstic són els teixits amb lesions granulomatoses per tant quan cal mostrejar animals sacrificats per resultats desfavorables a les proves in vivo cal fer un esforç addicional per trobar aquestes lesions. La tuberculosi por limitar-se a petites lesions mil·limètriques impossibles de detectar macroscòpicament o, en un altre extrem, podem trobar lesions de mida molt gran o quadres generalitzats com una tuberculosi perlada. Quan no observem lesions visibles, cal palpar amb atenció els pulmons i inspeccionar el més detalladament possible els nòduls limfàtics (NL) de l’animal. En cas de trobar lesions, la mostra que cal remetre és la de la lesió amb una mica de teixit sa adjacent. En una animal infectat els micobacteris es trobaran allà on hi hagi lesions, per tant aquesta mostra és la que més garanties d’èxit diagnòstic tindrà.
En cas d’animals sense lesions visibles compatibles amb tuberculosi el manual indica que cal prendre mostres dels següents limfocentres:
- Cap: NL retrofaríngics i NL submandibulars
- Tòrax: NL mediastínic caudal i NL traqueo-bronquial esquerre
- Membre toràcic: NL pre-escapulars
- Cavitat abdominal: NL hepàtic i NL mesentèrics
- Glàndula mamària: NL supra-mamaris
En negreta hem marcat els més rellevants en la patogènia de la tuberculosi en bovins.
Presa de mostres dels NL retrofaringis (NL RF).
Incidències a evitar:
- Mostreig de només un dels dos nòduls limfàtics (es redueixen les possibilitat de detecció de lesions).
- Mostreig, per error, de la tonsil·la palatina.
A: cap de boví separat de la canal, penjat per la mandíbula i presentat per a la inspecció de músculs masseters i NL RFs. Els NL RFs es localitzen dorsalment a la faringe. En aquesta presentació la llengua i la faringe han estat retirades ventro-caudalment després de seccionar el paladar tou, deixant exposats tant els NL RF com les tonsil·les palatines (TON). B: Algunes vegades, com en la imatge, si el tall al paladar és prou profund els NL RFs poden quedar més externs, als costats de la base de la llengua.
Detall d’un altre exemple de crani del boví presentat a la inspecció penjat de la mandíbula: la llengua i la faringe han estat retirades ventro-caudalment exposant els NL RFs (a la imatge estan seccionats) i les tonsil·les palatines (TON) també seccionades a la part superior, al paladar tou.
Presa de mostres dels NL toràcics: traqueobronquial esquerre (NL TB) i mediastínic caudal (NL MD).
Incidències a evitar:
- Mostreig per error del NL mediastínic cranial (menys representatiu).
Pulmons de boví penjats per la tràquea: si retirem l’aorta, que es troba al mediastí -espai entre els dos pulmons-, podrem trobar el NL MD caudal (NL MD cd), es troba a la membrana serosa que separa els dos hemitòraxs a la part mes caudal, propera al diafragma. El NL MD cd és molt allargat (pot fer uns 10-15cm), és important no confondre’l amb altres NL més petits que hi ha al mediastí i que es troben més cranialment (NL MD Cr) que són menys representatius del drenatge limfàtic dels pulmons.
Pulmons de boví penjats per la tràquea: per localitzar el NL TB esquerre cal retirar cranialment l’aorta (i l’esòfag, si ha quedat enganxat) tal i com es mostra a la imatge i localitzar la bifurcació de la tràquea. El NL TB esquerre es troba entre la tràquea i l’aorta i el bronqui esquerre, en el punt on la tràquea es bifurca. Si l’animal té un bon estat de carns és normal que estigui rodejat de teixit adipós i costi de trobar.
Presa de mostres dels NL abdominals: NL mesentèrics (NL MS) i NL hepàtic (NL H).
Incidències a evitar:
- Mostreig per error de la glàndula adrenal (enlloc del NL hepàtic).
- Inframostreig del NL mesentèric (si tant sols agafem un sol nòdul petit és poc probable que trobem lesions, cal localitzar la porció més allargada).
Fetge de boví penjat per a inspecció: es mostra la cara visceral, el ganivet assenyala el NL H. Cal anar amb compte i no confondre’l amb la glàndula adrenal (Gld Adrenal) que pot quedar adherida al fetge en extreure’l de la cavitat abdominal.
Fetge de boví: detall del NL H (seccionat a la imatge) on es pot observar una escorça de color grisós clar i una medul·la de color negrós. A la part superior observem la glàndula adrenal (Gld Adrenal), també seccionada que presenta una medul·la de color clar i escorça de color marronós. En cas de dubte de si una estructura és un NL sempre es pot seccionar i observar-ne les característiques del parènquima.
Aparell digestiu de boví. Per localitzar el NL MS cal estendre el mesenteri, la membrana serosa de la qual pengen els intestins, i localitzar la cadena de nòduls limfàtics que es troben en aquesta membrana, recomanem mostrejar el més allargat ja que si tant sols mostregem un petit nodulet la probabilitat de detectar lesions es redueix. Solen estar recoberts de teixit adipós que en dificulta la localització. Ru: rumen; Ab: abomàs: Om: omàs: Re: reticle; Je: jejú i Ce: cec.
Un altre exemple de NL MS de boví. Quan hi ha poques reserves greixoses és més fàcil identificar-los.
Presa de mostres dels NL pre-escapulars (NL PE) i NL supra-mamaris (NL SupMa).
Incidències a evitar:
- Mostreig de només un dels dos nòduls limfàtics (es redueixen les possibilitat de detecció de lesions).
Canal de boví: per localitzar el NL PE cal dissecar amb el ganivet la musculatura de davant de l’espatlla, el NL es troba a sota del múscul trapezi.
Braguer de boví separat de la canal: els NL SupMa es troben sobre la glàndula al apart més cranial, són arrodonits i aplanats.
Presa de mostres per al diagnòstic de paratuberculosi.
La paratuberculosi està causada per Mycobacterium avium paratuberculosis i a vegades aquesta infecció pot interferir en les proves de diagnòstic de tuberculosi. En alguns casos es sol·liciten mostres per poder descarar a també aquesta patologia que cursa amb un engruiximent de la paret intestinal, limfangièctasi i limfadenomegàlia dels nòduls limfàtics mesentèrics i ileocecals per la presència d’un infiltrat inflamatori granulomatós generalment difús tot i que, en casos greus, pot fer granulomes nodulars semblants del de la tuberculosi.
La mostra d’elecció és el nòdul limfàtic (NL IC) i vàlvula ileocecals (VIC), tot i que per a efectes de diagnòstic mostrejant un fragment d’uns 10 cm de l’íleum distal ja és suficient. És important que sigui íleum distal (proper a la vàlvula) ja que allà hi ha abundant teixit limfoide associat a l’intestí (GALT, per les seves sigles en anglès) que és on inicialment veurem les lesions.
Aparell digestiu de boví: per localitzar la vàlvula ileo-cecal (VIC) cal primer identificar el cec, agafar-lo i observar-lo d’un costat i altre fins a visualitzar el punt en que la part més distal de l’íleum (últim tram de l’intestí prim) s’insereix al cec, aquest punt és la vàlvula ileo-cecal. A la foto ampliada de la dreta hem marcat en blau el cec i en vermell el darrer fragment de íleum (aquest tros vermell seria la mostra diana per al diagnòstic, idealment abans de posar-la al recipient convé netejar-ne amb aigua el contingut fecal). El nòdul limfàtic ileo-cecal (NL IC) es troba molt proper a la vàlvula, cal dissecar el greix del voltant de la mateixa per localitzar-lo. En la imatge de l’esquerra també es podem observar les NL MS seccionats. Ru: rumen, Om: Omàs; Je: jejú, Ce: cec.
Què fem quan arriben les mostres al laboratori?
Les mostres s’han de remetre en refrigeració cap al laboratori el més aviat possible per evitar creixement de microbis contaminants que poden interferir en les proves microbiològiques. En cas de demorar-se mes de 48h és recomanable congelar les mostres per evitar autòlisi tot i que la congelació pot reduir el número de micobacteris viables i també dificulta l’estudi histopatològic.
Al laboratori es realitza un filetejat de tots els nòduls limfàtics, amb un gruix de 3mm, amb l’objectiu de detectar lesions que hagin pogut passat per alt a la inspecció post-mortem. En cas de trobar-ne es confirma que siguin compatibles amb tuberculosi a l’estudi histopatològic i amb la tinció de Ziehl Neelsen es busquen bacils àcid alcohol resistents. També s’agafa mostra de lesió per fer PCR de micobacteris i cultiu microbiològic. Si no hi ha lesions visibles s’agafa un fragment de nòdul limfàtics RF, TB i MD aparentment sans per fer histologia, PCR i cultiu.
Nòdul limfàtic pre-escapular de boví: detecció d’una lesió encapsulada i d’aspecte caseós supuratiu (fletxa). En aquest cas es classifica macroscòpicament com a “No concloent” ja que és una lesió poc característica de tuberculosi, però podria ser compatible. L’estudi histològic va evidenciar que es tractava d’una lesió piogranulomatosa amb presència de colònies bacterianes i es va descartar tuberculosi.
Finalment recordar que aquest procediment de mostreig aplica als animals que el DARPA indica mostrejar per aplicació del programa de vigilància de la tuberculosi bovina, bé perquè han obtingut resultats desfavorables a les proves de camp o bé perquè es tracta d’un boví de seguiment, però cal recordar un altre component molt important dels inspectors oficials d’escorxador, que és la vigilància passiva, és a dir: detectar i enviar per analitzar lesions granulomatoses en animals que no hagin estat diagnosticats en vida. Per assolir l’objectiu de remissió de 0.17 granulomes no tuberculosos per cada mil animals sacrificats (marcat pel Ministeri d’Agricultura) a Catalunya, caldria analitzar cada any uns 85 granulomes no tuberculosos. Per això és important palpar pulmons i seccionar nòduls limfàtics per evidenciar lesions incipients.
☣️Advertència de bioseguretat: La tuberculosi és una zoonosi, és a dir, pot afectar als humans. Sempre que es prenguin mostres d'animals positius a proves de TB es necessari l'ús d'equips de protecció individual (guants, ulleres i màscara). En cas de manipular lesions tuberculoses, on es troben els micobacteris, cal considerar el guant contaminat i desfer-se'n adequadament (residu bioperillós). (EV)
