Muestreo de nódulos linfáticos en canales de vacuno para el diagnóstico de tuberculosis
En el marco del programa de erradicación de la tuberculosis bovina, el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación obliga a la toma de muestras para el diagnóstico de tuberculosis en todos aquellos animales que han dado positivo a las pruebas de piel (intradermotuberculinización) y que son sacrificados en el matadero. El objetivo es poder confirmar la enfermedad y aislar la micobacteria para poder realizar estudios de epidemiología molecular que nos ayudarán a entender el origen de cada brote: infección residual, contacto con reservorios domésticos o silvestres, etc. Y así poder tomar las mejores decisiones necesarias en cada caso.
El control de la tuberculosis es muy complejo y depende de muchos factores que el resultado de los esfuerzos del programa sea exitoso. En esta entrada queremos repasar, en el contexto de la inspección veterinaria de las canales, el muestreo de los tejidos diana a fin de asegurar que éste resultará en una máxima sensibilidad diagnóstica. En alguna ocasión detectamos alguna incidencia y comentaremos las más comunes y la localización anatómica de las distintas muestras.
El Ministerio editó un manual de muestreo que puede consultar aquí.
La muestra de elección para el diagnóstico son los tejidos con lesiones granulomatosas por tanto cuando es necesario muestrear animales sacrificados por resultados desfavorables a las pruebas in vivo es necesario realizar un esfuerzo adicional para encontrar estas lesiones. La tuberculosis puede limitarse a pequeñas lesiones milimétricas imposibles de detectar macroscópicamente o, en otro extremo, podemos encontrar lesiones de gran tamaño o cuadros generalizados como una tuberculosis perlada. Cuando no observemos lesiones visibles, hay que palpar con atención los pulmones e inspeccionar lo más detalladamente posible los nódulos linfáticos (NL) del animal. En caso de encontrar lesiones, la muestra a remitir es la de la lesión con algo de tejido sano adyacente. En un animal infectado las micobacterias se encontrarán donde existan lesiones, por lo que esta muestra es la que más garantías de éxito diagnóstico tendrá.
En caso de animales sin lesiones visibles compatibles con tuberculosis el manual indica que es necesario tomar muestras de los siguientes linfocentros:
- Cabeza: NL retrofaríngicos y NL submandibulares
- Tórax: NL mediastínico caudal y NL traqueo-bronquial izquierdo
- Miembro torácico: NL pre-escapulares
- Cavidad abdominal: NL hepático y NL mesentéricos
- Glándula mamaria: NL supra-mamarios
En negrita hemos marcado a los más relevantes en la patogenia de la tuberculosis en bovinos.
Toma de muestras de los NL retrofaríngeos (NL RF).
Incidencias a evitar:
- Muestreo de sólo uno de los dos nódulos linfáticos (se reducen las posibilidad de detección de lesiones).
- Muestreo, por error, de la tonsila palatina.
A: cabeza de vacuno separada de la canal, colgada por la mandíbula y presentada para la inspección de músculos maseteros y NL RFs. Los NL RFs se localizan dorsalmente en la faringe. En esta presentación la lengua y la faringe han sido retiradas ventro-caudalmente después de seccionar el paladar blando, dejado expuestos tanto los NL RF como las tonsilas palatinas (TON). B: Algunas veces, como en la imagen, si el corte en el paladar es lo suficientemente profundo los NL RFs pueden quedar más externos, a los lados de la base de la lengua.
Detalle de otro ejemplo de cráneo del vacuno presentado para la inspección colgado de la mandíbula: la lengua y la faringe han sido retiradas ventro-caudalmente exponiendo los NL RFs (en la imagen están seccionados) y las tonsilas palatinas (TON) también seccionadas en la parte superior, en el paladar blando.
Toma de muestras de los NL torácicos: traqueobronquial izquierdo (NL TB) y mediastínico caudal (NL MD).
Incidencias a evitar:
- Muestreo por error del NL mediastínico craneal (menos representativo).
Pulmones de vacuno colgados por la tráquea: si retiramos la aorta, que se encuentra en el mediastino -espacio entre los dos pulmones-, podremos encontrar el NL MD caudal (NL MD cd), se encuentra en la membrana serosa que separa los dos hemitóraxes en la parte más caudal, próxima al diafragma. El NL MD cd es muy alargado (puede medir unos 10-15cm), es importante no confundirlo con otros NL más pequeños que hay en el mediastino y que se encuentran más cranealmente (NL MD Cr) que son menos representativos del drenaje linfático de los pulmones.
Pulmones de vacuno colgados por la tráquea: para localizar el NL TB izquierdo es necesario retirar cranealmente la aorta (y el esófago, si ha quedado enganchado) tal y como se muestra en la imagen y localizar la bifurcación de la tráquea. El NL TB izquierdo se encuentra entre la tráquea y la aorta y el bronquio izquierdo, en el punto donde la tráquea se bifurca. Si el animal tiene un buen estado de carnes es normal que esté rodeado de tejido adiposo y cueste encontrarlo.
Toma de muestras de los NL abdominales: NL mesentéricos (NL MS) y NL hepático (NL H).
Incidencias a evitar:
- Muestreo por error de la glándula adrenal (en lugar del NL hepático)
- Inframuestreo del NL mesentérico (si sólo muestreamos un solo nódulo es poco probable que encontremos lesiones, es necesario localizar y tomar muestra de la porción más alargada)
Hígado de vacuno colgado para inspección: se muestra la cara visceral, el cuchillo señala el NL H. Hay que tener cuidado y no confundirlo con la glándula adrenal (Gld Adrenal) que puede quedar adherida al hígado al extraerlo de la cavidad abdominal.
Hígado de vacuno: detalle del NL H (seccionado en la imagen) donde se puede observar una corteza de color grisáceo claro y una médula de color negruzco. En la parte superior observamos la glándula adrenal (Gld Adrenal), también seccionada que presenta una médula de color claro y corteza de color marrón. En caso de duda de si una estructura es un NL siempre se puede seccionar y observar sus características del parénquima.
Aparato digestivo de vacuno. Para localizar el NL MS es necesario extender el mesenterio, membrana serosa de la que cuelgan los intestinos, y localizar la cadena de nódulos linfáticos que se encuentran en esta membrana, recomendamos muestrear el más alargado ya que si sólo muestreamos un pequeño nódulo la probabilidad de detectar lesiones se reduce. Suelen estar recubiertos de tejido adiposo que dificulta su localización. Ru: rumen; Ab: abomaso: Om: omaso: Re: retículo; Je: yeyuno y Ce: ciego.
Otro ejemplo de NL MS de vacuno. Cuando hay pocas reservas grasas es más fácil identificarlos.
Toma de muestras de los NL pre-escapulares (NL PE) y NL supra-mamarios (NL SupMa).
Incidencias a evitar:
- Muestreo de sólo uno de los dos nódulos linfáticos (se reducen las posibilidad de detección de lesiones).
Canal de boví: per localitzar el NL PE cal dissecar amb el ganivet la musculatura de davant de l’espatlla, el NL es troba a sota del múscul trapezi.
Braguer de boví separat de la canal: els NL SupMa es troben sobre la glàndula al apart més cranial, són arrodonits i aplanats.
Toma de muestras para el diagnóstico de paratuberculosis
La paratuberculosis está causada por Mycobacterium avium paratuberculosis y en ocasiones esta infección puede interferir en las pruebas de diagnóstico de tuberculosis. En algunos casos se solicitan muestras para poder descartar también esta patología que cursa, en general, con un engrosamiento de la pared intestinal, linfangiectasis y linfadenomegalia de los nódulos linfáticos mesentéricos e ileocecales por la presencia de un infiltrado inflamador granulomato difuso pero que, en casos más avanzados, puede producir lesiones nodulares similares al de la tuberculosis.
La muestra de elección es el nódulo linfático (NL IC) y válvula ileocecales (VIC), aunque para efectos de diagnóstico muestreando un fragmento de unos 10 cm del íleon distal ya es suficiente. Es importante que sea íleon distal (próximo a la válvula) ya que allí hay abundante tejido linfoide asociado al intestino (GALT, por sus siglas en inglés) que es donde inicialmente veremos las lesiones.
Aparato digestivo de vacuno: para localizar la válvula ileo-cecal (VIC) es necesario primero identificar al ciego, agarrarlo y observarlo de un lado y otro hasta visualizar el punto en que la parte más distal del íleon (último tramo del intestino delgado) se inserta al ciego, este punto es la válvula. En la foto ampliada de la derecha hemos marcado en azul el ciego y en rojo el último fragmento de íleon (este trozo marcado en rojo sería la muestra diana para el diagnóstico, idealmente antes de ponerla en el recipiente conviene limpiar con agua su contenido fecal). El nódulo linfático ileo-cecal (NL IC) se encuentra muy cercano a la válvula, es necesario disecar la grasa alrededor de la misma para localizarla. En la imagen de la izquierda también se pueden observar las NL MS seccionados. Ru: rumen, Om: Omaso; Je: yeyuno, Ce: ciego
¿Qué hacemos cuando llegan las muestras al laboratorio?
Las muestras deben remitirse en refrigeración hacia el laboratorio lo antes posible para evitar crecimiento de microbios contaminantes que pueden interferir en las pruebas microbiológicas. En caso de demorarse más de 48h es recomendable congelar las muestras para evitar autolisis aunque la congelación puede reducir el número de micobacterias viables y también dificulta el estudio histopatológico.
En el laboratorio se realiza un fileteado de todos los nódulos linfáticos, en cortes con un grosor de 3mm, con el objetivo de detectar lesiones que hayan podido pasar por alto en la inspección post-mortem. En caso de encontrarlos se confirma que sean compatibles con tuberculosis en el estudio histopatológico y con la tinción de Ziehl Neelsen se buscan bacilos ácido alcohol resistentes. También se toma muestra de lesión por hacer PCR de micobacterias y cultivo microbiológico. Si no hay lesiones visibles se toma un fragmento de nódulo linfático RF, TB y MD aparentemente sanos para hacer histología, PCR y cultivo.
Nódulo linfático pre-escapular de vacuno: detección de una lesión encapsulada y de aspecto caseoso supurativo (flecha). En este caso, se clasifica macroscópicamente como “No concluyente” ya que es una lesión poco característica de tuberculosis, pero podría ser compatible. El estudio histológico evidenció que se trataba de una lesión piogranulomatosa con presencia de colonias bacterianas y se descartó tuberculosis.
Finalmente recordar que este procedimiento de muestreo aplica a los animales que el DARPA indica muestrear por aplicación del programa de vigilancia de la tuberculosis bovina, bien porque han obtenido resultados desfavorables en las pruebas de campo o bien porque se trata de una res de seguimiento, pero hay que recordar otro componente muy importante de los inspectores oficiales de matadero, que es la vigilancia pasiva, es decir la detección de lesiones compatibles con TB en animales que no hayan sido diagnosticados en vida. Para alcanzar el objetivo de remisión de 0.17 granulomas no tuberculosos por cada mil animales sacrificados marcado por el Ministerio de Agricultura, en Cataluña, habría que analizar cada año unos 85 granulomas no tuberculosos. Por eso es importante palpar pulmones y seccionar nódulos linfáticos para evidenciar potenciales lesiones incipientes.
☣️Advertencia de bioseguridad: La tuberculosis es una zoonosis, es decir, puede afectar a los humanos. Siempre que se tomen muestras de animales positivos en pruebas de TB es necesario el uso de equipos de protección individual (guantes, gafas y máscara). En caso de manipular lesiones tuberculosas, donde se encuentran las micobacterias, es necesario considerar el guante contaminado y deshacerse adecuadamente (residuo biopeligroso). (EV)
